Western blot (bazen protein immünoblot olarak da adlandırılır) veya western blotlama, bir doku homojenatı veya ekstrakt numunesindeki spesifik proteinleri tespit etmek için moleküler biyoloji ve immünogenetikte yaygın olarak kullanılan bir analitik tekniktir. Proteinleri tespit etmenin yanı sıra bu teknik, karmaşık bir protein kombinasyonundaki farklı proteinleri görselleştirmek, ayırt etmek ve ölçmek için de kullanılır.
Western
blot tekniği, belirli bir proteini bir kompleksten ayırma görevini yerine
getirmek için üç unsur kullanır:
·
boyuta göre ayırma,
·
proteinin katı bir desteğe aktarılması,
·
görselleştirmek için birincil ve ikincil bir
antikor kullanarak hedef proteini işaretleme.
Teknikte,
belirli bir hedef proteini tanıyan ve ona bağlanan sentetik veya hayvan-kaynaklı
bir antikor (birincil antikor olarak bilinir) oluşturulur. Elektroforez membranı,
fazla antikor yıkanmadan önce birincil antikoru içeren bir çözelti içinde yıkanır.
Birincil antikoru tanıyan ve ona bağlanan ikincil bir antikor eklenir. İkincil
antikor, boyama, immünofloresan ve radyoaktivite gibi çeşitli yöntemlerle
görselleştirilir ve spesifik hedef proteinin dolaylı olarak tespit edilmesine
olanak tanır.
Diğer
ilgili teknikler arasında dot blot analizi, kantitatif dot blot, immünohistokimya
ve immünositokimya, enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA) bulunur.
Western
blot adı, mucidi İngiliz biyolog Edwin Southern'in adını taşıyan bir DNA tespit
tekniği olan Southern blot'un bir oyunudur. Benzer şekilde, RNA'nın saptanması
da northern blot olarak adlandırılmıştır.
‘Western
blot’ terimi, 1981'de W. Neal Burnette tarafından verildi, ancak yöntemin
kendisi bağımsız olarak 1979'da Stanford Üniversitesi'nden Jaime Renart, Jakob
Reiser ve George Stark, ve İsviçre'nin Basel kentindeki Friedrich Miescher Enstitüsü'nden
Harry Towbin, Theophil Staehelin ve Julian Gordon tarafından icat edildi. Towbin
grubu aynı zamanda tespit için ikincil antikorları da kullandı; dolayısıyla
bugün neredeyse evrensel olarak kullanılan gerçek yönteme benziyor. 1979 ile
2019 yılları arasında ‘PubMed listesinde yer alan 400 000'den fazla yayının başlıklarında,
özetlerinde ve anahtar kelimelerinde bahsedilmiştir’; hala en çok kullanılan
protein analizi tekniği olabilir.
Kısaltmalar: SDS: sodium dodecyl sulfate, PAGE:
Poliakrilamid Jel Elektroforezi, PVDF:
poliviniliden diflorür, TBST: 1X
Tris-Tamponlu Salin, %0,1 Tween 20 Deterjan (1X Tris-Buffered Saline, 0.1%
Tween 20 Detergent)
https://en.wikipedia.org/wiki/Western_blot
15
Temmez 2024
GERİ (biyoloji)
