Ultraviyole, Görünür Spektrofotometre; Tipik Cihazlar (typical devices)

UV ve görünür bölgede çalışan pek çok ticari cihaz bulunur. Bunların en basiti kolorimetrelerdir; kıyaslama gözle yapılır. En karmaşık olanları ise çift-ışın yollu kaydedicili cihazlardır; bunlar 185-3000 nm aralığına kadar geniş bir spektral bölgeyi tarayabilirler.


1. Fotometreler

Fotometreler absorbsiyon analizlerinin yapıldığı basit ve fazla pahalı olmayan aletlerdir. Bir filtreli fotometrenin kullanım rahatlığı, bakım kolaylığı, ve sağlamlığı çok gelişmiş spektrofotometrelerde yoktur. Çok yüksek spektral saflığın gerekmediğinde, kompleks bir cihazda olduğu kadar doğru sonuçlar elde edilebilir.

Görünür (Visible) Fotometreler: Şekil-8'de iki fotometrenin şematik diagramı görülmektedir. Birincisi tek-ışın yollu, doğrudan-okumalı bir cihazdır; bir tungsten-filamen lamba, paralel ışın demeti veren bir mercek, bir filtre, ve bir fotovoltaik hücre bulunur. Oluşan akım, ön yüzünde 0-100 arasında skala bulunan bir mikroampermetrede gösterilir. Işık yolu üzerindeki örneğin yaptığı absorbsiyonun tamamını skalaya alabilmek için, bazı cihazlarda lambaya verilen voltajı değiştirecek sistemler takılmıştır, bazılarında ise bu ayarlama ışık yolu üzerine konulan bir diyaframın açıklığı değiştirilerek yapılır. Fotovoltaik hücreden çıkan sinyaller aldığı ışın ile orantılı olduğundan ışın yolu üzerinde bir örnek bulunduğunda skalada gözlenen değer tüm skalaya göre % geçirgenlik değeri olur. Tabii örneğin doğrudan adsorbsiyonunun ölçülmesi için logaritmik bir skala da bulunabilir.

İkinci tip fotometreler çift demetli, sıfır-ayarlıdır (Şekil-8b). Bunlarda kaynaktan gelen ışın bir ayna ile ikiye bölünür, bir kısmı örnekten geçerek fotovoltaik hücreye giderken diğer kısmı solventten geçer ve başka bir fotovoltaik hücreye gider. İki fotovoltaik hücreden çıkan akımlar değişken dirençlerden geçerler. Bu dirençlerden biri 0-100 arasında geçirgenliğe göre kalibre edilmiştir. İki direnç arasında null-metre (sıfır ayarlayıcı) olarak çalışan hassas bir galvanometre bulunur, AB arasındaki potansiyel düşmesi CD arasındakine eşit olduğunda galvanometreden elektrik geçmez; diğer tüm koşullarda ise bir akım oluşur.

Başlangıçta her iki hücreye de solvent konur ve A bağlantısı 100'e getirilir, C bağlantısı ise galvanometrede hiç akım görülmeyecek şekilde ayarlanır. Örnek hücresine ait ışın yolu üzerindeki solvent hücresi çıkarılıp örnek konulur. Işının bir kısmı örnek tarafından absorblanacağından çıkan ışının gücü azalır ve bu değişiklik fotovoltaik hücreye yansır ve CD'deki potansiyel düşer; AB ile CD arasında başlangıçta ayarlanan denge bozulur. Bu durumda A daha düşük değerlere kayarak dengeyi yeniden kurar. Denge, örneğin 50'de oluşmuşsa skaladan doğrudan % geçirgenlik (%50) değeri okunur. Çift-demetli fotometrelerde, voltaj değişiklikleri nedeniyle ışın kaynağında oluşan dalgalanmalar önemli derecede giderilebilir.

Probe-Tip (Elektrot) Fotometreler: Şekil-9'da bir daldırmalı fotometrenin şematik diyagramı verilmiştir. Bunda kaynaktan ışığın geçirilmesi bir optik fiberle yapılır. Işık, fiberin ucu ile bir ayna arasında bulunan çözelti tabakasına geçirilir; fiberin ucu cam ile kapatılmıştır. Aynadan yansıyan ışın ikinci bir cam fiberden bir fotodiod dedektöre geçer. Fotometrede, ışık kaynağı ile eşanlı çalışan elektronik kesicili bir amplifikatör vardır; böylece, fotometre fazla ışını almaz. Altı girişim filtresi bulunur. Bunlar cihaz panelindeki bir düğme ile değiştirilebilir. Prob uçları paslanmaz çelik, pyreks, asite dayanıklı plastiktir. Işık yolu 1mm-10 cm olabilir.


Şekil- 8: Tek ve çift-demetli fotometrelerin şematik görünümleri


Şekil-9: Bir prob tip fotometre


Absorbsiyon Analizlerinde Filtre Seçimi: Fotometrelerde her biri spektrumun belirli bir kısmını geçiren bir kaç filtre bulunur. Analizde uygun bir filtrenin seçimi çok önemlidir, çünkü ölçüm hassasiyeti doğrudan bu seçime bağlıdır. Absorblanan ısının rengi çözeltinin kendi renginin tamamlayıcısıdır.

Örneğin, bir sıvının kırmızı görülmesi sıvının spektrumdaki kırmızı kısımları geçirmesi yeşil kısımları absorblamasından ileri gelir. Konsantrasyonla değişen yeşil ışının şiddetidir; bu nedenle yeşil bir filtre kullanılması gerekir. Genel olarak bir fotometrik analiz için en uygun filtre, analiz edilen çözeltinin renk tamamlayıcısı olanıdır. Renk tamamlama özelliğini gösteren bir kaç filtre varsa bunlardan, örneğin en yüksek absorbansı (veya en düşük geçirgenliği) göstereceği filtre tercih edilir.

Ultraviyole Absorbsiyon Fotometreleri: Ultraviyole fotometrenin en önemli uygulaması yüksek-performanslı sıvı kromatografisinde dedektör olarak kullanılmasıdır. Bu uygulamada kaynak olarak bir civa buharı lambası bulunur ve 254 nm'deki emisyon bandı filtrelerle yok edilir. Bu tip dedektörler sıvı kromatografisi bölümünde detaylı olarak incelenecektir.

Ultraviyole fotometreler, fabrikalardaki gaz veya sıvı akımların içerdiği bir veya daha çok sayıdaki bileşenlerinin konsantrasyonlarını izlemekte (sürekli olarak) de kullanılır. Tipik uygulamalar arasında atık suda fenol, gazlarda klorür, civa, veya aromatiklerin izlenmesi ve atmosferde hidrojen sülfür/sülfür dioksit oranının saptanması sayılabilir.


2. Spektrofotometreler

Görünür Bölgede Çalışan Cihazlar: Genel görünür bölge olan 380-800 nm arasında çalışan çeşitli spektrofotometreler bulunur; cihazlar bu limitler içinde fakat değişik aralıklarda çalışacak şekilde dizayn edilebilirler.

Görünür bölge spektrofotometreleri çoğunlukla basit, tek-yollu, gratingi (prizma sistemi) bulunan ve çok pahalı olmayan aletlerdir; kutu içinde ve taşınabilir tipleri çok kullanılır. Kullanım amacı kantitatif analizlere yöneliktir.

Şekil-10'da tipik iki görünür spektrofotometrenin şematik diyagramı verilmiştir. Şekil-10a'da Bausch and Lomb Spektronik 20'nin şematik diyagramı görülmektedir. Tungsten-filamen ışık kaynağından çıkan ışındaki dalgalanmaları düzenlemek amacıyla kaynaktan önce bir referans fototüp konmuştur; böylece lambaya sürekli sabit bir akım verilme zorunluluğu giderilmiştir. İki fototüp arasındaki sinyal yükseltilerek 5.5 inc skalalı bir ölçme aletine gönderilir; skala geçirgenlik ve absorbansa göre kalibre edilmiştir.

Spektronik 20'de, küvet (örnek hücresi) tutucusundan çıkarıldığı zaman otomatik olarak ışın ile dedektörün arasına giren bir kapak sistemi bulunur; böylece %0 T ayarı ve kontrolü yapılabilir. Şekil-10a'da görülen ışık kontrol sistemi ise V-şeklinde bir yarıktır; göstergede %100 T ayarı bu yarığı hareket ettirerek yapılır. Spektronik 20'nin çalışma aralığı 340-625 nm’dir; bir fototüp ile üst sınır 950 nm’ye çıkarılabilir. Cihazda 20 nm genişliğinde band elde edilebilir ve dalga boyu ölçümünde ki hassasiyet ±2.5 nm’dır.

Şekil-10b'deki Turner cihazında bir tungsten filamen kaynak, "Ebert yerleşimli"bir düzlem yansıtma gratingi, ve 210-710 nm aralığında hassas bir fototüp dedektör bulunur. Sonuçların okunduğu sistem geçirgenlik ve absorbansa göre kalibre edilmiştir; skala 4 veya 7 inc olabilecek şekilde iki tiptir. Önce, bir kapak ile lamba ve dedektörün birbiriyle ilişkisi kesilerek geçirgenlik sıfıra ayarlanır. Işın yolu üzerine solvent hücresi konulur ve sabit ışık gücü geçirgenlik %100 olacak şekilde ayarlanır. Bu işlemlerden sonra skalada örneğin geçirgenliği veya absorbansı doğrudan okunur. Cihaz 9 nm kalınlığında band verebilir ve dalga boyu ±0.2 nm hassasiyetle saptanabilir. Fotometrik doğruluk %0.5 A dır.

Ultraviyole - Görünür Bölgeyi Kapsayan Tek - Işın Yollu Cihazlar: Bazı cihazlar hem ultraviyole ve hem de görünür bölgede çalışabilecek şekilde dizayn edilmişlerdir. Bu tip cihazlardan 190-210 nm alt limitlerden 800-1000 nm üst limitlere kadar çıkan modeller vardır. Bunların hepsinde değiştirilebilen tungsten ve hidrojen (veya deutöryum) lambalar bulunur. Çoğunda dedektör olarak fotomültipler tüpler, dağıtıcı olarak da grating kullanılır. Bazılarında okuma sistemi digital, bazılarında skalalıdır.


Şekil-10: Band spektrofotometrelere iki örnek; (a) Spektronik 20 (Bausch and Lomb), (b) Turner 350 (Amoco Instrument Company)


Bu tip cihazların performans özellikleri oldukca farklıdır ve tabii fiatları da birbirinden çok değişiktir. Örneğin band genişliği 2-8 nm’ye, dalga boyu hassasiyeti ±0.5 - ±2mn ye kadar farklı cihazlar bulunur. Çeşitli gratingli cihazların optik dizaynları Şekil-10'da anlatılan sistemlerden çok farklı değildir. Düzlem grating yerine konkav grating kullanılabilir.

Şekil-11'de, ultraviyole ve görünür bölgede çalışabilen, tek-ışın yollu Beckman DU-2 spektrofotometresinin şematik diyagramı verilmiştir. Bu cihazda grating yerine bir Littrow prizması bulunur. Cihaz ilk defa 1941'de pazarlanmıştır, ilk ticari spektrofotometredir. Optik sistemi oldukça yüksek kalitelidir. Cihazın optik sistemi dizaynı hala bazı imalatçılar tarafından kullanılmaktadır.

DU-2 spektrofotometrede spektrumun ultraviyole ve görünür bölgelerinde çalışabilen kuvartz optik sistemler bulunur. Işın kaynakları, düşük dalga boylarındaki çalışmalar için deuteryum veya hidrojen deşarj tüpleri, görünür bölge için de tungsten filamen lambasıdır; kaynaklar kullanım amacına göre değiştirilebilir. Işın bir çift ayna ile yansıtılarak ayarlanabilir bir slitten (yarık) monokromatör bölmesine geçirilir, buradan paralelleştirici ayna ile bir Litrow prizmaya gönderilir; prizmanın konumu ayarlanarak istenilen dalga boyundaki ışık çıkış slitine odaklanır. Optik sistem, slitlerden giren ve çıkan demetler dik bir eksende üst üste bulunacak şekilde ayarlanmıştır; çıkan ışın monokromatörü giriş aynasının üstündeki slitten geçerek terk eder. Hücre bölmesinde hücrelerinin konduğu bir tutucu kompartman vardır; tutucunun konumu değiştirilerek hücrelerden herhangi biri ışın yolu üzerine getirilebilir (silindir şeklinde veya 10 cm'lik hücrelerle de çalışılabilir).

Orijinal DU-2 spektrofotometrelerde biri 190-625 nm, diğeri 625-800 nm aralığında olan değiştirilebilir iki dedektör kullanılır. Gilford, Instrument DU-2 için, bir fotometre modernizasyon sistemi geliştirmiştir. Sistemde, iki dedektörün (fototüp) dalga boyu aralığını kapsayan tek bir fotomultiplier kullanılır. Işın dedektörden sonra bir yükseltici devresine gönderilerek transduser sinyali absorbansla doğru orantılı olan voltaja çevrilir; okuma digital olarak yapılır. Yine Gilfordun geliştirdiği bir aksesuar ile hücre taşıyıcı kompartman, saniyede beş devir hızla salınım yaparak örnek ve referans hücrelerini sırayla ışın yolu üzerine getirir.


Şekil-11: Beckman DU-2 spektrofotometrenin şematik diyagramı


Böylece cihaz absorbans değerlerini otomatik olarak okur. Dalga boyu, slit-yürütme mekanizması ve bir kaydedici ilave edilerek spektrumun çizilmesi sağlanabilir.

Geliştirilmiş DU-2 spektrofotometrelerde yüksek-kaliteli elektronik kompartmanlar kullanılarak fotometrik hassasiyet %±0.5 A kadar yükseltilebilir, slit ayarının uygun bir şekilde değiştirilmesiyle 0.5 nm'den daha dar band genişlikleri elde edilebilir
Otomatik olmayan DU-2 spektrofotometreler daha çok belirli dalga boylarındaki kantitatif analitik ölçmelerde çok kullanılan cihazlardır.

Tek-Işınlı (Yollu) Bilgisayarlı Spektrofotometreler: 190-800 nm (bir aksesuar ile 900 nm'ye kadar) aralığında çalışan bilgisayarlı, kaydedicili, tek demetli spektrofotometreler yapılmıştır. Bu cihazlarla önce, ışın demeti yolunda referansla bir dalga boyu taraması yapılır. Alınan dedektör çıkışı rakamsal veriye dönüştürülerek bilgisayarın hafızasında saklanır. Sonra örnek taranır ve saklanan verinin yardımıyla absorbans hesaplanır. Spektrumun tamamı bir katod-ışını tüpünde iki saniye içinde görüntülenir. Tarama hızı 1200 nm/dak dır. Cihaza bağlı olarak çalışan bilgisayar çeşitli işlemler yapar; log absorbans, geçirgenlik, türev alma, görüntüleme, taramaların tekrarlanması, konsantrasyon hesapları, pik konumu ve yükseklik tayinleri, ve kinetik ölçmeler, gibi.

Daha önce de değinildiği gibi tek-kanallı cihazların çıkışı yüksek enerjilidir ve sinyal/gürültü oranları büyüktür ve örnek bölmelerinde gürültü oldukça azdır. Diğer taraftan, referans ve örnek çözeltilerinden alınan dedektör çıkışlarını sırayla kaydetme işlemi, kaynaklar ve dedektörlerdeki Flicker gürültüsü nedeniyle fazla hassas olmaz. İmalatçı firmalar bu kararsızlığın yeni kaynak dizaynı ve fotodedektördeki hafıza etkilerini giderebilecek yeni bir elektronik dizaynla giderilebileceğini belirtmektedirler. Bu cihazların fotometrik doğrulukları ±0.005 A veya ±%0.3 T olarak saptanmıştır; kayma 0.002A/s den daha küçüktür. Sabit yarıkların el ile değiştirilmesiyle 0.5, 1, ve 2 nm band genişlikleri elde edilebilir.

Ultraviyole - Görünür Bölgede Çalışan Çift - Işın Yollu Cihazlar: Ultraviyole-görünür bölgede çalışan çift-ışın yollu değişik spektrofotometreler bulunur. Bu tip cihazlar tek-demetli olanlara göre çok pahalıdır. Çok geliştirilmiş olan tipleri genellikle 185-3000 nm gibi geniş bir aralığı kapsar.

Şekil-12'de iki ayrı spektrofotometre görülmektedir. Üstte bulunan, otomatik olmayan bir ultraviyole-görünür spektrofotometredir; bu cihaz diğerine göre daha ucuzdur ve ışını dağıtmak ve giriş slitine göndermek için konkav bir gratingden yararlanılmıştır (Hitachi Model 100-60).

Bir motorla döndürülen sektör aynası demeti ikiye böler; bunlardan biri örnekten diğeri referanstan geçer ve tekrar birleşerek bir alternatif akım sinyali oluştururlar (iki ışının güçleri aynı olmamak koşulu ile). Bu sinyal büyütülür ve P ve P0 oranı şekline dönüştürülür. Okuma bir skala vasıtasıyla veya digital olabilir, bir kaydedici  bulunması halinde veriler grafik olarak elde edilir.

Şekil-12(b)'de yüksek performanslı kaydedicili bir spektrofotometrenin şematik diagramı görülmektedir (Varian Cary Model 219). Cary cihazının önemli bir özelliği çift-geçişli optik sisteminin bulunmasıdır; ışın örnek ve referans hücrelerine gönderilmek üzere ikiye ayrılmadan önce bir grating tarafından iki kere yansıtılır ve kırılır. Etki, bir çift monokromatördeki etkinin aynısıdır ve saçılan ışının dağılması fazlalaşır.

İki cihazın performans özellikleri oldukça farklıdır. Hitachi cihazı için, 220 nm'de rasgele ışın %0.07'den az, dalga boyu doğruluğu ±0.4 nm ve dalga boyu hassasiyeti (tekrarlanabilirliği) ±0.2 nm'dir. Aynı özellikler Cary cihazında sırasıyla %0.002'den az, ±0.2 nm ve ±0.1 nm'dır. Hitachinin potansiyometrik doğrusallığı 0.005-0.01 A, Carrynin ise 0.0016-0.003 A'dir. Ayrıca Cary cihazında sekiz (Hitachide üç) kaydedici aralığı, otomatik slit kontrolü, otomatik %0 T ayarı, ve konsantrasyonu digital olarak gösteren sistem de bulunur. Bir çok uygulamada, Şekil-12(a)'da görüldüğü gibi basit ve ucuz cihazlar kullanılarak yeterli sonuçlar alınabilir.

Tek - Işın Yollu ve Çift - Işın Yollu Cihazların Kıyaslaması: P ve P0'ın ölçülmesi, anında yapılması gereken işlemler olduğundan çift-ışınlı bir cihaz bu gerekleri en iyi şekilde karşılar, ayrıca kaynaktaki, dedektördeki ve amplifierdeki zamana bağımlı hataları, ve kısa süreli elektriksel dalgalanmaları giderir. Bu nedenlerle çift-demetli bir spektrofotometrede, tek-demetli spektrofotometrede olduğu kadar hassas elektriksel sistemlere gerek yoktur. Böyle bir avantajın dışında çift-demetli bir spektrofotometrenin sistemleri yine de daha özel ve karmaşıktır.

Tek-demetli cihazlar, tek bir dalga boyundaki absorbans ölçümleri ile yapılan kantitatif analizlerde çok iyi sonuçlar verirler. Burada cihazın basitliği ve bakımının kolaylığı önemli bir avantajıdır. Diğer taraftan ölçümlerin süratli ve absorbansın pek çok dalga boyunda ölçülebilmesi çift-demetli cihazların kalitatif analizlerdeki en önemli üstünlüğü olarak kabul edilir.


Şekil-12: İki ultraviyole-görünür spektrofotometrenin şematik diyagramı; (a) Hitachi model 100-60, (b) Varian Cary Model 219


Çok Kanallı Absorbsiyon Cihazları: 1970'li yılların ortalarında literatürde, spektrokimyasal ölçmelerde dedektör olarak silikon diod dizilerinin ve vidicon tüplerinin kullanıldığı çeşitli yayınlar bulunmaktadır. Bir monokromatörün odak düzleminde bu tip dedektörlerin bulunması halinde spektrum elektronik tarama (mekanik değil) ile elde edilir; bir spektrumu tanımlayan tüm veriler aynı anda alınır. Kontrol görevi yapan mikroişlemciler gibi çok kanallı dedektörler de çeşitli kaynaklardan sağlanabilir. Bu kaynaklardan bazıları spektrofotometre üreten firmalardır. 1980'e kadar ultraviyole-görünür bölgelerde absorbsiyon analizine uygun elektronik çok kanallı cihazlar üretilemedi.

Şekil-13'de 200-800 nm aralığında absorbsiyon ölçmelerinde kullanılan bir çok kanallı (veya paralel yollu) spektrofotometrenin şematik diyagramı görülmektedir. Diğer ultraviyole-görünür absorbsiyon cihazlarının tersine, örnek hücresi kaynak ve  monokromatör arasına yerleştirilmiştir. Spektrumun tüm elementlerinin aynı anda gözlenebilmesi yönünden bu yerleşim konumu zorunludur.

Şekil-13'deki cihazda bir tungsten/halojen lambası ve bir deutöryum lambasından oluşan kaynak sisteminin konumu oldukça ilginçtir; bunlar, lamba odası yarığında 200 nm'den 800 nm'ye kadar sürekli bir ışın demeti verebilecek şekilde yerleştirilmişlerdir. Böylece kaynağın anahtarla ayarlanmasına gerek olmaz. Diğer önmeli bir özellik bir kaynak elipsi ve bir spektrometre elipsi içeren çift elipsoidal optik sistemidir ve küresel optiklerle elde edilenden daha yüksek bir ışın enerjisi yaratır.

Lamba yarığı ve örnek bölmesi bir elipsin iki odağında, örnek bölmesi ve monokromatöre giriş sliti diğer elipsin iki odağında bulunur. Bu düzen, referans ve örnek hücreleri arasındaki alanda üç ilave örnek hücresi ve küp köşe aynaları konulmasına olanak verir (Şekil-13). Buradaki beş ışın demeti ile, dört örneğin absorbsiyon spektrası 6.4 saniye gibi bir zaman içinde alınabilir.

Bu cihazın önemli bir parçası, bir motor-sürücülü dikey şaft üzerine yerleştirilmiş bir çift düz aynadan oluşan servo-kontrollu demet yönlendiricisidir. Üstteki ayna demeti önce referans ve sonra da örnek hücrelerine yönlendirir. Alttaki ayna demeti sırayla spektrografın elipsoidal giriş aynasına yansıtır. Giriş yarığının iki çenesinin dış yüzeyleri uygun bir şekilde aynalanarak demetin kenarları iki büyük-alanlı fotodioda yansıtılır. Demetin her zaman yarık üzerinde odaklanması ayna şaftının konumu ayarlanarak sağlanır; ayarlama, bir servo mekanizmanın iki diodla kontrol edilmesiyle sağlanır.

Monokromatör, tek bir madde üzerinde yerleştirilmiş iki holografik gratingdir. Gratingler birbirine göre 3.5 derece eğimdedirler; böylece, 200-400 nm aralığında kırılan ışın bir dedektöre yönlenirken 400-800 nm aralığındaki diğer dedektöre geçer.Dedektörlerin her birinde 211 silikon diod, depolama kapasitörleri, ve 1/1 inç kadar uzunluktaki bir yarıiletken çip üzerinde oluşturulmuş transistör anahtarları bulunur; her diodun aktif yüzeyinin boyutları 0.6 x 0.5 mm dir (yarık görüntüsünün boyutları ile aynidir). Bu durumda cihazın band genişliği 200-400 nm bölgesinde 1 nm, 400-800 nm bölgesinde 2 nm’dir. Ciplerde, her kapasitörü seri olarak yükleyebilen devre vardır. Yükleme akımının integrasyonu, kuvvetlendirilmesi ve gürültü düzeltmesi bir önamplifikatörle yapılır.

Sinyal bundan sonra bir analog-digital çeviriciden geçerek, absorbans veya geçirgenliğin küçük bir katot-ışını tüpünde görüntülenmesini sağlayan bir mikro, işlemciye gider. Veriler bir  RAM’de saklanarak sonra bir kaydediciye gönderilebilir. Mikroişlemci diğer bazı fonksiyonları verebilecek şekilde programlanabilir; konsantrasyon ve standart sapmaların hesaplanması, pik maksimalarının bulunması, standartlarla kalibrasyon için eğri-yerleştirme, ve absorblayan karışımlardaki her bir bileşenin konsantrasyonunun hesaplanması, gibi.


Şekil-13: Bir çok kanallı çift-demetli spektrofotometre, HP 8450 A


Konsantrasyon hesaplamalarında her bileşenin standart çözeltilerinin spektrumları önceden hafızada depolanır. Bilinmeyen bir maddenin kantitatif verileri, buna en çok benzeyen bir spektrumun saptanması ve hafızadaki bilgilerin senteziyle bulunur. Tam bir spektrumun alınabilmesi ve işlenebilmesi için gerekli gerçek ölçüm zamanı 1 saniyeden daha azdır. Ölçüm sırası demetin, dedektöre ışın ulaşmayacak şekilde yönlendirilmesi sırasındaki ölü akımın saptanmasıyla başlar.

Yönlendiriciye demeti örnek konumuna çevirecek şekilde komut verilir. Demetin doğru konumda olduğu belirlendikten sonra her bir diod kapasitörüne seri halde akım yüklemesi başlar. Kapasitörlerin yüklemesi tamamlandığında ışın demeti referans hücreye döndürülür ve aynı işlem tekrarlanır.

Son olarak, demet tekrar ölü konuma getirilerek tekrar bir ölü akım ölçümü alınır. İşlem birkaç kez tekrarlatılarak sinyal/gürültü oranlarını yükseltmek için verilerin ortalaması alınır.

Fotobozunma göstermeyen (veya çok az gösteren) yüksek derecede foto hassas analitler için bile örneklerin ultraviyole ışınla teması çok kısa tutulmalıdır. Bundan başka, fluoresans girişimi en düşük düzeyde bulunmalıdır; fluoresans küresel olarak emitlendiğinden, demet yolundaki fraksiyon cihazın gürültü sınırından daha az olur. Son bir önemli konu da ters-optik dizaynının, örnek ve referans çözeltileriyle kaynak ve monokromatör arasına yerleştirilmesidir; böylece, zorunlu olan ışık-geçirmez örnek ve referans çözelti bölmelerine gereksinim olmaz.

Şekil-13'deki cihazla çok bileşenli karışımların kantitatif analizleri, hızı orta dereceli reaksiyonların ara kademeleri çalışmaları, kinetik incelemeler ve sıvı kromatografisi veya diğer tip kolonlardan alınan bileşenlerin kantitatif analizleri yapılabilir. Cihazın dezavantajları, spektrofotometrik çalışmalardaki sınırlı resolüsyon gücü (UV'de 1 nm, görünür bölgede 2 nm) ve çok pahalı olmasıdır.